Diagnóstico Genético
El examen genético requiere de una muestra de sangre que contenga leucocitos (glóbulos blancos). Estos glóbulos blancos son células con núcleo (a diferencia de los glóbulos rojos o eritrocitos que no tiene núcleo) el cuál contiene el material hereditario, el ADN.
Cerca del 60 % de los pacientes Duchenne tiene deleciones grandes de uno o más exones en el gen de la distrofina. Un 5 % de los pacientes tienen duplicaciones grandes de material genético. Debido a que estas deleciones y duplicaciones se presentan con mayor frecuencia en ciertas regiones del gen, analizando 19 de los 79 exones que componen el gen de la distrofina, 98 % de estas mutaciones pueden ser detectadas. En cerca de dos terceras partes de estos casos, la naturaleza del daño genético, i.e. se puede deducir si el marco de lectura se interrumpe o no, y por lo tanot se puede predecir si la mutación conducirá a distrofia Duchenne o Becker. Para el tercio restante, otros exones adicionales deben ser amplificados y analizados.
Las deleciones grandes son detectadas utilizando primers y la técnica Reacción de la cadena polimerasa multiplex para amplficar los exones de interés. Estos denominados primers son secuencias cortas de ADN que se unen al comienzo y final de una secuencia de exón. Los fragmentos de ge obtenidos de esta manera se separan usando la técnica de electroforesis , durante la cuál los fragmentos migran distancias diferentes sobre una película de gel dependiendo de su tamaño. Cuando estas placas de gel son reveladas se observan bandas con espacios diferentes como peldaños en una escalera. Una banda faltante, representa una deleción.
Si no se observa una deleción o duplicación grande por este método, se presume que sea una mutación puntual (sea una deleción, una sustitución o una inserción de uno o varios nucleótidos o bases). Para caracterizar tla mutación sin equivocación, se tendría que determinar la secuencia completa de las bases. Tal secuenciación es una determinación difícil que no se ofrece de manera rutinaria. En estos casos, un diagnóstico final sólo puede realizarse mediante la investigación de tejido muscular obtenido por una biopsia. La proteína distrofina es entonces analizada por la técnica Western blot.
En este método, después de la separación por electroforesis, el patrón de la proteína se transfiere a otro material portador por blotting, donde se hace visible con anticuerpos. O bien, anticuerpos fluorescentes se unen a la distrofina, los cuáles puede ser detectados bajo el microscopio como una líena brillante alrededor de las células musculares sanas. En la Distrofia muscular Duchenne, estas líneas no se ven o se ven solamente rastros, y en la distrofia Becker, esta líneas se ven interrumpidas o descoloridas comparadas con las normales.
Si un análisis genético da un resultado sin equivocación, la biopsia de músculo ya no se no se hace necesario. Los niños pequeños podrían así evitar este procedimiento quirúrgico. Sin embargo, si se requiere realizar una biopsia e músculo, ésta se puede conducir como una biopsia de aguja con anestesia local.
Fuente: Artículo publicado en inglés en el sitio de Action Duchenne www.actionduchenne.org/genediagnostics
Traducido por UPA!
